Народився 17 листопада 1901 року в містечку Будзанів, Австро-Угорщина (нині — БуданівТеребовлянський районУкраїна). Батьки — Іда та Борух Меєр Штрасберги (Штрасберґи) у 1908 році емігрували в США.

У 1931 році став одним із засновників театрального колективу «Group Theatre». У 1949 році почав працювати в школі акторської майстерності «Actors Studio» в Нью-Йорку. У 1952 році став її керівником, навчання вів за своєю методикою на основі системи Станіславського. Серед випускників школи багато відомих акторів — Пол НьюманАль ПачіноМерилін МонроДжейн ФондаДастін ГоффманРоберт де НіроМарлон БрандоМіккі Рурк.

У 1966 році заснував «Actors Studio West» у Лос-Анджелесі. У 1969 році заснував «Інститут театру і кіно Лі Страсберга». У 1974 році зіграв роль другого плану у фільмі «Хресний батько-2». За цю роль Штрасберг номінувався на кінопремії «Оскар»і «Золотий глобус».